1、高安(黄浩然饰)：法证部高级化验师，35岁。拥有冷静缜密的头脑、干练专注的工作能力，以科学为本，不作妄断，深信证物当中必定藏有真相。童年的一段沉痛过去成为高安心中无法弥补的遗憾，让他练就出无比意志，面对再难的关口也不轻易流泪。本与女友侯敏莉感情稳定，但在道义与爱情之间，敏莉选择了前者，并忍痛向高安提出分手。

2、闻家希(李施嬅饰)法医科高级医生，33岁。性格乐观，冷静理性，睿智果断。家希把姐姐作为偶像，可惜姐姐却意外逝世，家希化悲痛为力量，代替姐姐实践她生前的理想，励志成为法医。在命运的安排下，家希重遇姐姐的男友施见贤。因为她的声音和姐姐非常相似，见贤透过家希重拾往昔和她姐姐在一起的感觉，错将家希视作爱的替身。

3、郭辉煌(谭俊彦饰)重案组高级督察，37岁。重情谊、具魄力，乐于助人，不拘小节，奋勇坚持，一旦认清目标，便会朝着目标进发。实事实干，处事英明，凭着独到的感觉和谨慎的办案手法，成功破解不少疑案谜团，将真凶绳之以法。辉煌与慧明因工作而变得熟络，他在慧明大受打击之时从旁给予安慰和支持，两人情苗安长。

4、水慧明(陈炜 饰)法证部科学鉴证主任，38岁。聪慧过人，拥有出色的处事能力和良好的工作态度。面对工作时，既有女性的心思细密，也有男性的理性实际。视上司高安为学习对象，努力不懈，遇强愈强。慧明遭男友贺立维背叛，感情受创，庆幸辉煌在旁予以支持和鼓励，让她得以鼓起勇气，抽身而退。